1. 상세 매뉴얼 구성
◦ 견본(세균 게놈 DNA, 플라스미드 DNA, 동물 조직, 피, 식물 조직, 곰팡이, 진단등)그리고 DNS 추출 목적(PCR, 클로닝, DNA 시퀀싱 등.)추출 키트 사후 선택.
◦ 인터넷 검색이나 과학사를 통해 비교적 쉽게 구입할 수 있습니다.
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◦ DNS 추출 및 정제 DNA 준비(DNA 준비, 요약하자면 DNA 준비)말하다, 미량 추출 시 DNA 미니프렙그것은 말한다.
◦ 마이크로피펫 및 팁와류 혼합기(믹서), 마이크로 원심 분리기, 미니 원심 분리기, 욕조(욕조), 튜브 랙 준비.
◦ 56℃그리고 70℃추출 시간을 효과적으로 단축하기 위해 수조 대신 가열 블록을 사용합니다.
(가열 블록)추천하다.
◦ DNS 추출 및 정제 키트. DNS 흡수(제본)-씻다(씻다, 수잔)-용출(용출) 키트 제조사에 따라 방법이 조금씩 다르지만 일반적인 방법은 같습니다.
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◦ 실험 과정에서 약간의 차이가 있어도 순도나 농도 면에서 다른 결과가 나올 수 있으므로, DNS키트 설명서를 받고 싶다면(키트 메이커 프로토콜)미리 알아두시면 좋습니다.
◦ 세척용 완충액(세척 버퍼)순수한 에탄올에서(절대 EtOH)시약병의 표시까지(에 추가)하다.
◦ 각 단계 전 수조(욕조)의 온도 56℃나 70℃세트.
◦ 마이크로 원심 분리기(마이크로원심분리기)실온에서 사용할 미니 원심 분리기 준비, 필요에 따라 4℃ 냉각사전에 준비.
◦ 실온에서 사용할 시약 준비, 세포 용해 완충액(용해 버퍼, 이 키트에서 BL및 솔루션) 시약이 녹지 않는 경우 56℃그것에 용해.
◦ 실험실 준비. 모든 장비를 평평하고 단단한 표면에 놓으십시오..
◦ 샘플 준비. 세균 게놈 DNA, 플라스미드 DNA, 동물 조직 게놈 DNA, 피 게놈 DNA, 식물 조직 게놈 DNA, 곰팡이 게놈 DNA, 진단을 위해 DNS 등 추출 DNS키트의 내용은 용도에 따라 다를 수 있으므로 용도에 맞는 키트를 준비하십시오..
◦ 이 데이터북의 실험 예를 위한 키트는 동물 조직에서 파생됩니다.
게놈 DNA추출에 주로 사용.
◦ 밀어 넣는(균질화) 견본(동물 조직) 20mg 준비
◦ 세포 용해 완충액(용해 버퍼, ☞버퍼 CL) 200μl 에 추가(추가) – Vortexing(볼텍스 믹서)혼합)
◦ 단백질 분해 효소(프로테이나제 K)해결책 20μl 에 추가(추가) – 소용돌이
◦ 투명한 세포 용해물이 얻어질 때까지 56℃ 뜨거운 물에 담그십시오.
◦ 간단히 거절 (튜브의 내부 벽에 용액이 남지 않도록 미니 원심분리기에서 부드럽게 회전합니다.
)
◦ 세포 용해 완충액(용해 버퍼, ☞버퍼 BL) 200μl 에 추가(추가) – 소용돌이 – 70℃ 욕조 10분
◦ 순수한 에탄올(절대 EtOH) 200μl 에 추가(추가) – Vortexing(볼텍스 믹서)혼합) – 거절 (튜브의 내벽에 용액 방울이 남지 않도록 미니 원심분리기에서 부드럽게 회전합니다.
)
◦ 지금까지 준비한 세포 용해 믹스를 실리카 컬럼에 조심스럽게 놓습니다.
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◦ 6,000g 더 하나원심 분리기 분(미니 원심 분리기 사용 가능)
◦ 여과된 용액이 담긴 상자(수집관)컬럼을 버리고 새 하우징에 컬럼을 배치하십시오..
◦ 하나세차
◦ 세정액(세척 버퍼, ☞ 버퍼 대역폭) 600μl 에 추가(에 추가)
◦ 6,000g 더 하나원심 분리기 분(미니 원심 분리기 사용 가능)
◦ 여과된 용액이 담긴 상자(수집관)컬럼을 버리고 새 하우징에 컬럼을 배치하십시오..
◦ 2세차
◦ 세정액(세척 버퍼, ☞ 버퍼 TW) 600μl 에 추가(에 추가)
◦ 6,000g 더 하나원심 분리기 분(미니 원심 분리기 사용 가능)
◦ 필터 용기의 용액을 버리고 컬럼을 다시 삽입하십시오..
◦ 13,000g 더 하나원심 분리기 분(마이크로 원심 분리기 사용)컬럼 탈수 및 건조
◦ 컬럼을 멸균된 새 마이크로튜브로 옮깁니다.
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◦ 용출 용액(세척 버퍼, ☞ 버퍼 AE) 200μl 에 추가(에 추가)
◦ 용출액은 증류수로 대체 가능.
◦ 실온에서 하나가자.
◦ 13,000g 더 하나원심 분리기 분(마이크로 원심 분리기 사용)통해 용출 DNS튜브에 수집.
◦ 냉장고에 보관하거나 다음 실험을 계속하십시오..